2012年11月13日,由北京檢驗檢疫局承擔的國家質檢總局科技計劃項目--《豬傳染性胃腸炎病毒特異性單抗研制》、《豬的五種重要疫病基因芯片檢測技術研究》和《口蹄疫、禽流感HDA快速檢測技術研究》順利通過專家鑒定。專家一致認為:三個項目的研究成果均達到國際先進水平,填補了國內相關領域檢測技術研究的空白。
鑒定會上,由7名專家組成的鑒定委員會審查了項目組提交的相關資料,聽取了項目組的工作報告和技術報告,并對研究過程進行了質詢,經科學嚴謹、認真細致地審議鑒定后一致認為:三個項目的研究成果均達到國際先進水平,填補了國內相關領域檢測技術研究的空白,具有潛在的應用前景,同意通過項目成果鑒定。
豬傳染性胃腸炎是引起我國及世界各養豬國家仔豬早期死亡的重要疫病之一,具有高度接觸傳染性,可引起豬的嚴重腹瀉、嘔吐和脫水,對養豬業具有重大危害。在進出口國際貿易中,許多國家都要求在頒發進口許可證之前先確定豬群沒有感染TGE 病毒。我國與多個國家簽訂的活豬進出口檢疫雙邊條款中,明確規定對本病進行檢疫。目前國內尚沒有用于鑒別檢測血清中TGE 病毒和/或PRC 病毒抗體的ELISA 方法和試劑盒。
《豬傳染性胃腸炎病毒特異性單抗研制》項目組建立了豬傳染性胃腸炎病毒抗體檢測的間接ELISA和阻斷ELISA檢測技術,豬傳染性胃腸炎病毒與豬呼吸道冠狀病毒熒光RT-PCR鑒別檢測技術,并研制出3種檢測試劑盒,國內外未見報道;研制出的2種ELISA試劑盒可有效檢測豬傳染性胃腸炎病毒抗體,研制出的熒光RT-PCR試劑盒可有效用于豬傳染性胃腸炎病毒與豬呼吸道冠狀病毒的鑒別診斷,經與同類商品化診斷試劑盒符合性比較與臨床樣品驗證,試劑盒靈敏、特異。
據該項目主持人高志強博士介紹,研究成果采用生物技術,在重組表達豬傳染性胃腸炎病毒特異性表面蛋白的基礎上,研制出針對TGE病毒和PRC病毒的群特異性單抗和亞群特異性單抗,建立阻斷ELISA方法,在此基礎上研制出相應的診斷試劑,一方面用于國內動物疫病防控和養殖企業疫情監測,對于疫情的快速鑒別診斷和盡早采取防控措施、減數企業損失,防止疫情擴散方面可發揮重要作用;另一方面在進出口動物檢疫中應用,擺脫依賴進口試劑盒,促進和規范國產試劑使用,具有顯著的社會效益。
專家一致認為,該研究成果的應用將對口岸防止該病傳入以及國內疫病的快速檢測防控發揮重要作用。
《豬的五種重要疫病基因芯片檢測技術研究》項目組建立了一種同時提取并純化RNA和DNA的方法,并研制了核酸提取試劑盒;首次建立了同時在一個體系內檢測高致病性豬藍耳病、口蹄疫、豬瘟、豬戊型肝炎、豬鏈球菌的五重RT-PCR檢測方法;首次研制了同時檢測高致病性豬藍耳病、口蹄疫、豬瘟、豬戊型肝炎、豬鏈球菌等五種病原的基因芯片診斷試劑盒,敏感性高、特異性強。
據悉,基因芯片技術應用于豬疫病檢測有如下優勢:一是高通量、特異性強、靈敏度高,可在同一張芯片上對多個樣品進行多種豬病病原體的檢測,需要待檢樣品用量小,可特異性的鑒定病原體的亞型和變異;二是操作簡單、自動化、時間快,可大大縮短檢測時間,減少檢驗步驟,節約檢測成本。因此,建立重要豬病基因芯片診斷技術體系可檢測豬有無感染病原及感染程度,及時發現某些重要豬傳染病的病原體及其傳播情況,便于養豬生產中采取早期治療和隔離措施,降低豬病流行和突發感染帶來的經濟損失。同時高通量的基因芯片診斷技術體系大大縮短了檢測時間,可應用于樣品的大規模篩檢、快速檢測和鑒別診斷,尤其適用于進出境動物檢驗檢疫,可滿足動物及動物產品在進出口貿易中的快速通關要求。
口蹄疫是世界動物衛生組織(OIE)規定的必須通報的動物疫病,在我國被列為一類動物傳染病;禽流感被世界衛生組織(WHO)認為是對人類造成潛在威脅的最主要的疾病之一,我國也將高致病性禽流感列入一類動物傳染病進行防制。對于口蹄疫和禽流感這兩種疾病的防制工作是檢驗檢疫執法部門、食品安全監管部門和國際貿易工作者目前面臨的主要任務。
《口蹄疫、禽流感HDA快速檢測技術研究》項目組首次建立了針對口蹄疫病毒5'UTR基因的FMDV RT-HDA快速檢測技術和實時熒光FMDV RT-HDA快速檢測技術,研制出檢測口蹄疫病毒的RT-HDA試劑盒和實時熒光RT-HDA試劑盒;首次建立了針對禽流感病毒M基因的AIV RT-HDA快速檢測技術和實時熒光AIV RT-HDA快速檢測技術,研制出檢測禽流感病毒的RT-HDA試劑盒和實時熒光RT-HDA試劑盒;該項目研制的四種基于HDA技術的檢測試劑盒,靈敏度高,特異性強,適用于臨床疫病的監測和診斷,以及進出境動物的檢疫。
據悉,本項目運用"依賴解旋酶恒溫基因擴增技術"開發建立了重要人畜共患病口蹄疫和禽流感的HDA快速檢測方法,研發的出具有自主知識產權的試劑盒,填補了該項技術在口蹄疫和禽流感檢測應用方面的空白。HDA快速檢測技術具有簡單、高效的特點,適于在基層檢測部門和養殖場使用,進行疫情實時監測,及時淘汰和清除感染畜禽,降低病毒的感染率,有助于我國控制和凈化口蹄疫、禽流感。此外,該研究成果可以直接應用于引種和畜禽產品進出口貿易的檢疫工作中,保證嚴格的檢疫結果,為綠色食品安全保駕護航,具有重要的經濟效益和社會效益。